细胞污染怎么办？不要慌，教你快速鉴别+处理！

 

细胞质量决定实验的进程与结果，相信很多小伙伴在细胞培养上走了不少弯路，事实上因为细胞污染而耽误了实验进度，影响毕业和发文章的进程的事件时常发生。

所以今天普诺赛整理了一下细胞培养过程中出现的一些现象与处理方法，希望可以帮到大家。

一、细菌污染

细菌污染最为常见，一旦操作稍有不当，就会引起细胞污染，细菌污染后显微镜下观察呈现有黑色细条沙状，当然，根据感染的细菌不同，所呈现的状态也不尽相同，有球形、杆状等，其次，培养液发黄，变浑浊，可明显看见培养皿中有细沙状的沉淀物，时不时还有异样气味发出，如下图所示：

处理方法：

在培养基中加入抗生素处理，可以用四环素，庆大霉素，或者链霉素，前两者的工作浓度是50 μg/mL;链霉素的工作浓度是100 μg/mL。但是，细胞本身也有影响，状态大不如从前，所以，防范于未然，正确操作、严格执行无菌操作规范，定期清理消毒培养设施才是关键!

二、真菌污染

真菌污染培养液清亮透明，不会像细菌感染大爆发，所以很难早期发现，镜下有时候象丝状，有时候象珊瑚状，慢慢地会长出很细的黑色丝状物，这个时候，已经晚了，细胞很难救活了。

处理方法：赶紧扔掉，不要再想挽救，即使再珍贵。然后彻底消毒灭菌培养间，CO2孵箱，器皿和培养液。

三、霉菌污染

同真菌感染一致，因为培养液是清亮的，所以霉菌污染早期难以发现，等发现时往往已经为时过晚了。培养液中慢慢地出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，如同风中柳絮，一般不仔细看发觉不出来。细胞仍可生长，但时间一长，细胞的状态就变差，不再增长。见下图。

处理方法：建议果断舍弃该污染细胞，将环境彻底消毒，因为霉菌的顽固可能会导致下几批细胞都会污染，所以，采用酒精彻底底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新洁尔灭擦洗一遍，把水盘里加上饱和量的硫酸铜。千万不可大意!

四、支原体感染

培养液变浑浊，支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是细胞状态变差、生长变慢，在显微镜下观察可能会有小黑点，但培养基一般不发生浑浊。细胞传代以后就出现细胞间黑点，细胞空泡化，很多类似凋亡、坏死的细胞，最终细胞漂浮，完全死亡。

处理方法：

如果不是很珍贵的细胞的话，建议直接扔了吧。还是那句话，预防为主，如果是珍贵的细胞的话，建议使用——支原体清除培养基。

推荐——Procell 支原体清除培养基

此款支原体清除培养基是Procell在市面上已有的支原体清除培养基基础上开发的新一代产品，含有清除支原体的特殊成分(一种混合制剂，可通过抑制DNA和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清除效果，最大程度上挽救珍贵的细胞，减少因支原体污染带来的损失)。

此产品经过了数十种细胞的测试和长期的实验验证，对细胞无害，对清除支原体污染效果显著，能够很好的抑制和杀灭支原体。并且安全可靠，工作浓度低，无细胞毒性。

使用Procell支原体清除培养基处理污染细胞前后对比图：

五、黑胶虫污染

开始污染时对细胞无影响，当数量达到一定程度时就会对细胞产生影响。400倍显微镜下可见点状或片状游动小体，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。

处理方法：可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率，尽早处理细胞，越快越好。如果实在来不及了，推荐使用——黑胶虫清除培养基

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使用Procell黑胶虫清除培养基理污染细胞前后对比图：

温馨提醒：

学会对各种污染情况的辨别和处理是一项不可或缺的实验技能，希望大家在看完我们的文章后结合你的实验操作，学会如何应对细胞污染。